数据分析基线数据分析基线数据分析基线数据分析基线数据分析阈值线数据分析阈值线常见问题分析PCR扩增抑制（以Bio-CFX96为例）扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。H07存在扩增抑制；解决方法：将样本稀释后进行扩增。
模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
实时荧光定量PCR（qPCR）是一种精确测定DNA扩增过程中目标序列含量的实验技术，其数据处理与理解是关键。这个技术利用荧光标记的PCR产物在每次循环后的积累来实时监测，从而得出Ct值，进而推断模板基因的浓度。基本原理上，PCR反应过程被划分为四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。
qPCR数据处理方法为△△Ct法原理 【△△Ct法原理】其特点是只依靠Ct值来计算结果，因此跑完qPCR之后的结果中除了Ct值外，其他数据几乎在后续分析和计算中是用不到的。但前提是目的基因和内参基因的扩增效率应基本一致。
summary为三颗星，即代表该数据具有统计学意义，并且为三颗星。第七步：返回属性图数据。即点击左边的Graphs下面的Data 1，点击最上面的Draw下面横线，选择横线，点击Write下面的黑体字T，在横线上面标记星号或者ns即可。该例子里的统计学分析为3颗星。完美的QPCR数据分析图就做出来啦。
荧光定量PCR（qPCR）就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于常规的PCR的缺点，荧光定量PCR（ qPCR）由于其操作简便，灵敏度高，重复性好等优点发展非常迅速。
实时荧光定量PCR（qPCR）是一种精确测定DNA扩增过程中目标序列含量的实验技术，其数据处理与理解是关键。这个技术利用荧光标记的PCR产物在每次循环后的积累来实时监测，从而得出Ct值，进而推断模板基因的浓度。基本原理上，PCR反应过程被划分为四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。
如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin）CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
数据分析基线数据分析基线数据分析基线数据分析基线数据分析阈值线数据分析阈值线常见问题分析PCR扩增抑制（以Bio-CFX96为例）扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。H07存在扩增抑制；解决方法：将样本稀释后进行扩增。
实时荧光定量PCR（qPCR）是一种精确测定DNA扩增过程中目标序列含量的实验技术，其数据处理与理解是关键。这个技术利用荧光标记的PCR产物在每次循环后的积累来实时监测，从而得出Ct值，进而推断模板基因的浓度。基本原理上，PCR反应过程被划分为四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。
1、荧光定量PCR技术主要依赖于两种荧光化学物质：荧光探针和荧光染料。方法上分为特异性和非特异性两大类。特异性方法，如使用基因特异寡核苷酸探针，通过标记荧光染料在PCR反应中检测产物，具有较高的特异性，但过程较为复杂。
2、荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。
3、样品准备：将待检测样品中的DNA或RNA提取出来，并进行纯化和浓缩。试剂制备：制备PCR反应体系所需的试剂，包括PCR反应缓冲液、酶、荧光探针等。PCR反应：将样品中的DNA或RNA与PCR反应体系中的试剂混合，进行PCR反应。反应过程中，荧光探针与目标分子结合，发出荧光信号。
4、提取RNA： 从细胞或组织中提取RNA，为后续逆转录成cDNA打下基础。逆转录与预实验： 通过逆转录得到cDNA，同时考虑个体差异和预实验以优化反应条件。熔解曲线与Ct值： 预实验确保熔解曲线清晰，Ct值在15-30范围内，避免非特异性扩增和异常值。样本分配： 设计稀释梯度，确保样本均匀分配，减少加样误差。
5、荧光定量PCR技术是一种高效且实时的定量分析方法，它通过在PCR反应中加入荧光化学物质，监测PCR过程中的荧光信号变化，实现对目标模板的精确计数。技术上，分为荧光染料法和荧光探针法两种。
如果是做的相对定量，用CTmean的结果就可以了，计算方法就是R＝2-ΔΔCt，现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因，这个结果也是会有自带软件给计算出来的。
看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
实时荧光定量PCR（qPCR）是一种精确测定DNA扩增过程中目标序列含量的实验技术，其数据处理与理解是关键。这个技术利用荧光标记的PCR产物在每次循环后的积累来实时监测，从而得出Ct值，进而推断模板基因的浓度。基本原理上，PCR反应过程被划分为四个阶段：基线期、指数增长期、线性增长期和平台期。
